重组胰蛋白酶的最佳温度和温度稳定性

样品：重组胰蛋白酶，比活力4000 USPu / mgpro。
上海亚新生物科技有限公司的纯度如图1所示。
BAEE，西格玛。
图1
通过SDS-PAGE鉴定重组胰蛋白酶的纯度
1
最佳温度研究
BAEE底物（0。
将25mM）置于4℃，15℃，20℃，25℃，30℃，40℃，50℃，60℃和70℃的水浴中20分钟。在加入相同量的RPT酶溶液以确定rPT活性几分钟后，显示结果确定该值作为最高酶活性的百分比。
2
温度稳定性研究
取10 mg / ml纯RPT酶溶液，稀释10倍，置于4°C，15°C，20°C，30°C，40°C，50°C，60°C的浴液中。在70℃下在水中加热2小时，每20分钟测量酶的活性，并将结果表示为以最大酶活性的百分比测量的值。
图2
最佳温度曲线RPT。b，RPT温度稳定性
将基板置于4℃，15℃，20℃，25℃，30℃，40℃，50℃，60℃和70℃水浴中，然后加入相同量的纯酶溶液中进行活性。
图2a显示温度越高，测量的酶的活性越高。
酶的反应速度在60℃时很快，酶的活性最高。然而，温度继续升高，胰蛋白酶自动水解变得强烈，并且酶活性的丧失加速。
将酶溶液置于4℃，15℃，25℃，30℃，40℃，50℃，60℃的水浴中和70℃的水浴中。如图2b所示，每20分钟检测残余酶活性，以获得rPT的热稳定性曲线。
在4℃下，rPT最稳定，并且在2小时内残余酶活性超过97％。随着温度的升高，分子结构发生变化，分子间的碰撞增加，酶的结构被破坏，rPTLα速度的降低也增加。
在50℃下，酶的残余活性可在2小时内达到约60％，在60℃下，酶的残余活性可在2小时内达到约10％，胰蛋白酶在20分钟内完全达到。它会停用。在70°C。
3
重组胰蛋白酶在运输条件下的稳定性
试剂：
1.重组胰蛋白酶冻干粉（批号：RPT1305001）
测量缓冲液：25mM Tris-HCl缓冲液（pH 7）。
6）含有100mM NaCl，5mM CaCl 2
3,0。
HCl 001 M：将HCl稀释至1M并稀释1000倍至pH 3-4。
底物溶液（2）。
5mmol / L）：精确称量N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯（BAEE）（Sigma）42。
加入8毫克相应体积的50毫升试验缓冲液使其溶解，得到2。
现在可以使用5 mmol / L底物母液。使用时，用测试缓冲液稀释10倍。
5.对于测试样品：准确测量要分析的适当样品量。
将3个片平行包裹，置于蓝色冰绝缘运输箱中，置于室温下。
实验方法：
重组胰蛋白酶在转运条件下的稳定性：分析样品以确定其作为初始活性的活性。
将蓝冰完全预冷至-20℃，取出，与样品同时放入泡沫绝缘包装箱中并放入温度记录仪中。2天后，将其取出并测量活性并取平均值。
初始酶活性测定为100％，测量结果表示为残留酶活性的百分比。
实验结果
运输过程中的温度变化曲线如图3所示。
结论：重组胰蛋白酶在低温条件下在蓝冰培养箱中稳定。
没有活动损失，活动维持在100％。
图3
运输过程中的温度曲线